Efeito da somatotropina bovina recombinante (rbST) na produção in vivo e na maturação in vitro de oócitos bovinos da raça Sindi / Effect of recombinant bovine somatotropin (rbST) on the in vivo production and in vitro maturation of bovine oocytes of the Sindi breed

A fim de avaliar o efeito de diferentes doses da rbST sobre a dinâmica folicular, a produção e a maturação in vitro de oócitos, 20 vacas Sindi, divididas em três grupos, receberam um dispositivo de progesterona intravaginal, estradiol e PGF2α, além de 2mL de solução salina (grupo controle), 250 (grupo rbST 250) ou 500mg de rbST (grupo rbST 500). Cinco dias depois, realizou-se a ovum pick up, e os complexos cumulus-oócitos (CCOs) recuperados foram selecionados, classificados e maturados in vitro. Os dados de contagem foram comparados pelo procedimento glht (General Linear Hypothesis Test), e os dados em porcentagem foram submetidos ao qui-quadrado, no programa estatístico R, onde as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Não houve diferença (P>0,05) entre os grupos quanto à quantidade de folículos e à taxa de maturação. Os grupos rbST 250 e rbST 500 foram significativamente superiores (P<0,05) ao grupo controle em relação ao número de folículos grandes (0,42±0,20 vs. 0). O grupo rbST 500 apresentou maior (P<0,05) porcentagem de oócitos viáveis (91,52%) do que os grupos controle (67,85%) e rbST 250 (53,33%). A rbST aumenta o número de folículos grandes, e 500mg de rbST aumentam a porcentagem de oócitos viáveis em vacas Sindi.(AU)

In order to evaluate the effect of different doses of rbST on the follicular dynamics, production, and in vitro maturation of oocytes, 20 Sindhi cows were divided into three groups, receiving an intravaginal progesterone device, estradiol and PGF2α, and 2mL of solution saline (Control Group), 250 (rbST 250 Group) or 500mg rbST (rbST 500 Group). Five days later, the ovum pick up was performed, and the cumulus-oocyte (CCO) complexes recovered were selected, classified, and matured in vitro. The counting data were compared by the glht (General Linear Hypothesis Test) procedure, and the percentage data were submitted to Qui- square, in the statistical program R, where differences were considered significant when P< 0.05. There was no difference (P> 0.05) between the groups regarding follicle quantity and maturation rate. The rbST 250 and rbST 500 groups were significantly higher (P< 0.05) than the Control group in relation to the number of large follicles (0.42±0.20 versus 0). The rbST 500 group presented higher (P< 0.05) percentage of viable oocytes (91.52%) than the Control (67.85%) and rbST 250 (53.33%) groups. rbST increases the number of large follicles and 500mg rbST increases the percentage of viable oocytes in Sindhi cows.(AU)

Desempenho de doadoras leiteiras mestiças F1 (Gir x Holandês) no sistema de produção in vitro de embriões / Performance of dairy crossbred F1 donnors (Gir x Holstein) in the production system in vitro embryo

O Brasil atualmente é detentor do terceiro maior rebanho de vacas leiteiras do mundo, composto, em sua maioria, de animais mestiços F1 (Gir X Holandês), os quais são bem adaptados às áreas tropicais. O objetivo do presente estudo foi investigar a eficiência da ovum pick-up (OPU) e da produção in vitro de embriões oriundos de doadoras Girolando com sêmen sexado de touros provenientes de duas raças, Gir e Holandesa. Foram utilizados dados referentes a 232 animais de diversos rebanhos, totalizando 4334 oócitos recuperados. Os oócitos foram classificados, e as estruturas viáveis (GI, GII e GIII) foram utilizadas para produção in vitro de embriões (PIVE). Foi observada uma média de oócitos recuperados para as doadoras F1 de 18,14±1,33. Além disso, notou-se que não houve diferença entre os dois cruzamentos utilizados, considerando média de total de embriões (4,96±0,40 e 6,56±0,76) para o cruzamento F1 X HPB (Holandês preto e branco) e F1 X Gir, respectivamente. Portanto, as doadoras F1 apresentaram potencial como doadoras de oócitos no sistema de produção in vitro de embriões, independentemente da raça do touro cujo sêmen foi utilizado.(AU)

Brazil currently has the third largest herd of dairy cattle in the world, composed mainly by F1 crossbreed animals (Gyr x Holstein), which are well adapted to tropical areas. The aim of this study was to evaluate the efficiency of Girolando donors in OPU and in vitro production of embryos (IVEP) using sexed semen of bulls from two breeds, Gyr and Holstein. We used data from 232 animals coming from different herds and the total of recovered oocytes was 4334. The oocytes were classified according to their viability and the viable ones (GI, GII and GIII) were used for IVP. The average of oocyte recovery from F1 donors was 18.14±1.33. There was no difference on the average of embryos considering the crossing F1 X Holstein (4.96±0.40) and F1 X Gyr (6.56±0.76). In conclusion, F1 donors showed a potential for being oocyte donors in the system of in vitro production of embryos, regardless the breed of the bull.(AU)

Association between BMP4 gene polymorphism and in vitro embryo production traits in Gyr cows / Asociación entre polimorfismo en el gen BMP4 y características de producción in vitro de embriones en vacas Gyr / Associação entre o polimorfismo no gene BMP4 e características de produção in vitro de embriões em vacas Gyr

Background: candidate genes and their polymorphisms have been associated with traits of economic interest in cattle, representing an important strategy for genetic improvement of complex traits. Bone morphogenetic protein 4 (BMP4) is a member of the transforming growth factor beta (TGFβ) superfamily, which is involved with several events of embryonic, fetal, and adult development in vertebrates. Objective: the aim of this study was to evaluate the degree of association between polymorphism in the BMP4 gene (guanine for thymine- G>T, SNP rs109778173) and the performance of Gyr oocyte donors, including the rate of Cumulus-oophorus complex obtained in each session of follicular aspiration (OPU), embryo development, and pregnancy rates. Methods: DNA was extracted from hair follicles from 50 oocyte donors and genotyping was performed by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Data from 212 OPU-IVP sessions was collected, and the following traits were associated with BMP4 polymorphism (SNP rs109778173): number and ratio of viable Cumulus-oophorus complexes; number of cleaved embryos at day 4 of culture; number of transferable embryos at day 7 of culture, and pregnancies on days 30 and 60 after embryo transfer. Results: the studied BMP4 polymorphism was significantly associated (p<0.01) with the number and ratio of viable cumulus-oocyte complexes, and the ratio of pregnancies at 30 days. Conclusion: the GT genotype (SNP rs109778173) was associated with inferior performance regarding OPU-IVP traits. This finding suggests possible genetic effects of BMP4 on performance of Gyr oocyte donors. Studies are needed on the BMP4 gene regarding subsequent changes in embryonic development of said mutation.

Antecedentes: genes candidatos y sus polimorfismos han sido asociados a características de interés económico en ganado, representando una excelente estrategia para el mejoramiento genético de características complejas. La proteína morfogénica ósea 4 (BMP4) es un miembro de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGFβ); que controla innumerables eventos del desarrollo embrionario, fetal y de adultos en vertebrados. Objetivo: el objetivo de este estudio fue evaluar el grado de asociación entre un polimorfismo en el gen BMP4 (guanina por timina-G>T-, SNP rs109778173) y el desempeño de donantes de ovocitos de la raza Gyr, incluyendo la tasa de complejos cummulus-oophorus obtenidos en cada sesión de aspiración folicular (OPU), el desarrollo embrionario y la tasa de preñez. Métodos: el ADN fue extraído del folículo piloso de 50 vacas Gyr donantes de ovocitos, el genotipado fue realizado por la técnica de reacción en cadena de polimerasa-polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (PCR-RFLP). Datos de 212 sesiones de OPU-IVP fueron colectados y las características a seguir fueron asociadas con el polimorfismo en el gen BMP4 (SNP rs109778173): número y tasa de complejos de Cumulus-oophorus viables, de embriones clivados al día 4 de cultivo, de embriones transferibles al día 7 de cultivo, y de preñeces a los días 30 y 60 posterior a la transferencia de los embriones. Resultados: el polimorfismo fue significativamente asociado (p<0,01) con número y tasa de complejos Cumulus-oophorus viables y tasa de preñez al día 30. Conclusión: el genotipo GT (SNP rs109778173) fue asociado a resultados inferiores relacionados con características de OPU-IVP. Este resultado sugiere posibles efectos genéticos del gen BMP4 sobre el desempeño de donadoras de oocitos de la raza Gyr, siendo necesarios estudios del gen BMP4 en relación a las alteraciones en el desarrollo embrionario subsecuentes a la mutación citada.

Antecedentes: genes candidatos e seus polimorfismos têm sido associados a características de interesse econômico no gado bovino, representando uma importante estratégia para o melhoramento genético de características complexas. A proteína morfogênica óssea 4 (BMP4) é um membro da superfamília do fator de crescimento transformante beta (TGFβ); que controla diversos eventos do desenvolvimento embrionário, tanto fetal quanto adulto em vertebrados. Objetivo: avaliar o grau de associação entre um polimorfismo no gene BMP4 (guanina por timina-G>T-, SNP rs109778173) e o desempenho de doadoras de oócitos da raça Gyr, incluindo a taxa de complexos Cumulus-oophorus obtidos em cada sessão de aspiração folicular (OPU), o desenvolvimento embrionário e a taxa de prenhez dos embriões. Métodos: o DNA foi extraído do folículo piloso de 50 vacas Gyr doadoras de oócitos, e a genotipagem foi realizada pela técnica de reação em cadeia da polimerase-polimorfismo no comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP). Dados de 212 sessões de OPU-IVP foram coletados, e as características a seguir foram associadas com o polimorfismo no gene BMP4 (SNP rs109778173): número e taxa de complexos Cumulus-oophorus viáveis dos embriões clivados no dia 4 de cultivo, dos embriões transferíveis no dia 7 de cultivo e de prenhezes no dia 30 e 60 após a transferência dos embriões. Resultados: o polimorfismo estudado foi significativamente associado (p<0,01) com o número e a taxa dos complexos Cumulus-oophorus viáveis e a taxa de prenhezes ao dia 30. Conclusão: o genótipo GT (SNP rs109778173) foi associado a resultados inferiores relacionados a características OPU-IVP. Este resultado sugere possíveis efeitos genéticos do gene BMP4 sobre o desempenho de doadoras de oócitos da raça Gyr, fazendo-se necessários estudos no gene BMP4 em relação às alterações no desenvolvimento embrionário subsequentes ao polimorfismo citado.

Fatores anatomofisiologicos que afetam a qualidade oocitária em bovinos / Anatomophysiologic factors affecting oocyte quality in cattle

Para estudar os fatores anatomofisiológicos que interferem na qualidade de complexos cumulus-oócitos (CCOs) bovinos, foram obtidas 396 ovários após abate de 198 fêmeas Bos indicus em frigorífico. Os ovários foram separados por categorias, sendo distribuídos em nulípara vs multípara e com progesterona (P4 - presença de corpo lúteo em um dos ovários) vs sem progesterona (NP4 - ausência de corpo lúteo). Todos os folículos foram mensurados e categorizados em pequenos (<6mm), médios (6 a 9mm) ou grandes (>9mm). Em seguida todos os folículos foram puncionados e os CCOs recuperados e avaliados morfologicamente. Não houve diferença na taxa de recuperação nem na qualidade dos CCOs de fêmeas nulíparas vs multíparas. O percentual de CCOs desnudos/degenerados foi maior no grupo NP4 e os CCOs expandidos foram superiores no grupo P4. A taxa de recuperação e o percentual de CCOs selecionados para PIV (graus I e II) foram similares nos grupos P4 vs NP4. Folículos pequenos apresentam menor taxa de recuperação em comparação aos de tamanho médio e grande, porém o percentual de CCOs de grau I foi superior em folículos pequenos e médios. Diante dos resultados aqui encontrados conclui-se que a categoria da doadora e a progesterona não influenciaram a qualidade de CCOs selecionados para PIV e que folículos menores apresentam de CCOs de melhor qualidade.(AU)

To study the anatomical and physiological factors that affect the bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) quality, were examined 396 ovaries obtained after slaughter of 198 Bos indicus females. Ovaries were categorized in nulliparous vs multiparous and progesterone (P4 - a corpus luteum at least one ovary) vs without progesterone (NP4 - absence of corpus luteum). All follicles were measured and categorized into small (<6mm), medium (6 to 9mm) or large (>9mm). Then all follicles were punctured and COCs recovered and assessed morphologically. There was no difference in COCs recovery rate or quality from nulliparous vs multiparous females. The rate of denuded or degenerated oocytes was higher in NP4 and expanded COCs were higher in P4. The COCs recovery and grades I and II rates were similar in P4 vs NP4 groups. Small follicles have lower COCs recovery rate than medium or large follicles, but the grade I oocytes rates was higher in small and medium follicles. In conclusion, the category of donor female and progesterone did not affect the quality of COCs selected for PIV and smaller follicles present best quality of COCs.(AU)

Tratamento com anti-inflamatórios sobre a quantidade e qualidade dos complexos Cumulus oophorus aspirados dos ovários de novilhas / Treatment with anti-inflammatory on the quantity and quality of the Cumulus oophorus complexes aspirated from the ovaries of heifers

A produção de embrião in vitro (PIV) associada à aspiração folicular transvaginal guiada O número médio de folículos a serem aspirados (imagem ultrassom) foi semelhante em todos os tratamentos (p>0,05). O Grupo III apresentou menor média de COC’s viáveis (p<0,05), enquanto o grupo Controle e o tratado com flunixin meglumine apresentaram média de COC’s viáveis semelhante (p>0,05). O número médio de COC’s aspirados no Grupo Controle foi 19,52 ± 11,00 COC’s e o de COC’s viáveis de 14,09 ± 8,53 por sessão de aspiração folicular. O número médio de ovócitos Grau I e II foi semelhante entre os grupos experimentais (p>0,05). No entanto, o número médio de ovócitos Grau III foi menor nos animais tratados com meloxicam (p<0,05). O número de ovócitos sem cumulus foi semelhante entre os grupos experimentais (p>0,05), enquanto o número de ovócitos atrésicos apresentou diferença somente entre os grupos tratados com anti-inflamatório (p<0,05), onde os animais tratados com meloxicam, apresentaram menor número médio de ovócitos atrésicos.

The production of bovine embryo in vitro (PIV) associated to the ultrasound-guided transvaginal folicularaspiration (OPU - Ovum pick-up) provided an increment in the reproduction productivity of cows, being of great importancefor the fast multiplication of these animals. However, it can cause morphologic and functional alterations in the ovaries. Thisstudy aims to evaluate the anti-inflammatory effects on the quantity and quality of cumulus oophorus complexes (COC’s)aspirated from the ovaries of crossbred heifers treated with anti-inflammatory. In order to do so, 18 heifers were divided inthree treatment groups, being Group I Control, II treated with Flunixin Meglumine (1.1 mg/Kg - Banamine®) and III treatedwith Meloxican (0,5 mg/kg - Maxicam®). The animals were submitted to ten OPU’s, being the collected oocytes quantifiedand evaluated. The average number of follicles to be aspirated was similar in all the treatments (p> 0.05). Group III showeda smaller average number of viable COC’s (p<0.05), whereas the Control group and the one treated with flunixin meglumineshowed a similar average number of viable COC’s (p>0.05). In the Control Group the average number of aspirated COC’swas 19.52 ± 11.00 COC’s and the average number of viable COC’s was 14.09 ±8.53 per folicular aspiration session. Theaverage number of oocytes of Degree I and II was similar among the experimental groups (p> 0.05). However, the averagenumber of oocytes of Degree III was smaller in the animals treated with meloxicam (p<0.05). The number of oocytes withoutcumulus was similar among the groups (p> 0.05), whereas the number of atresic oocytes showed difference among the groupstreated with anti-inflammatory, where that one treated with meloxicam showed a smaller average number of atresic oocytes.

Protocolo prospectivo de pieloplastia laparoscópia pediátrica; del estrés a la tranquilidad / Prospective protocol for laparoscopic pyeloplasty in pediatrics; from stress to tranquility

La resolución quirúrgica de una obstrucción pieloureteral (OPU), con mayor frecuencia se realiza de forma laparoscópica. Siendo un procedimiento difícil per-se, consideramos que para optimizar tiempos, materiales y esfuerzo es necesario involucrar a todo el equipo quirúrgico. Se evalúa protocolo quirúrgico prospectivo, con ajuste de protocolo a mitad del estudio en post de mejorar los tiempos quirúrgicos. Método: Estudio prospectivo de 12 casos de pacientes >5kg con OPU y MA G3 con dificultad de vaciamiento; en quienes se aplicó el protocolo quirúrgico para pieloplastia laparoscópica (pasos quirúrgicos, características de suturas, pig-tail y material quirúrgico). Todos los casos fueron operados por 2 cirujanos con experiencia laparoscópica urológica avanzada (>5 años); un mismo ayudante y dos instrumentistas. Después de los primeros 6 pacientes (grupo A) se analizó y perfeccionó el protocolo quirúrgico, comparando posteriormente resultados y en especial tiempo quirúrgico con los siguientes 6 (grupo B). Resultados: La serie incluyó 9 hombres. La mediana para edad fue de 9.3 meses. El peso promedio fue 16. 7 kg (20.4 vs 13.1 kg respectivamente). En grupo A se realizaron 4 derechas y 2 izquierdas, y el grupo B fue inverso (4 izquierdas). Tres de doce pacientes presentaban OPU secundaria a vasos aberrantes. El tiempo quirúrgico promedio por grupo fue de 171.2 (120-200 min) vs 141.7 (90-210 min) respectivamente. El seguimiento promedio fue 19.6 meses (13-24 meses), todos los pacientes tuvieron buena evolución, con MA G-3 sin obstrucción al vaciamiento y disminución de la hidronefrosis. Conclusiones: Consideramos que la disminución del tiempo quirúrgico en el segundo grupo se debió tanto a la integración del equipo como al perfeccionamiento del protocolo quirúrgico: en la técnica, colocación de un cuarto trocar, forma de colocar pig-tail, tipo y tamaño de suturas, preparación...

Laparoscopic surgical resolution for an ureteropelvic junction obstruction (UPJO) is being widely used around the world. lt is considered as a hard and difficult procedure per-se, we considered for time, materials and effort Optimization; to involve every single member of the surgical team. A surgical protocol was developed and revised, with some adjustments in the middle looking forward to reduce surgical time. Method: Prospective study including 12 patients <5kg weight with UPJO and difficult emptying MA G-3; to whom a surgical protocol for laparoscopic pyeloplasty was applied (surgical steps, suture characteristics, stent and surgical material). All cases were operated by 2 advanced skilled laparoscopic surgeons (>5 year experience); same assistant surgeon and two different surgical assistants. After the first 6 cases (group A) the protocol was revised and improved, comparing results especially surgical time with group B (n=6). Results: The series included 9 male, median ages was 9.3 months. Average weight was 16. 7 kg (20.4 vs 13.1 kg for each group). Four right-sided pyeloplasties and 2 left-sided were performed in group A, and opposite in group B (4 left-side). Three of twelve patients had UPJO secondary to polar vessels. The mean surgical time was 171.2 ( 120-200 min) vs 141. 7 (90-210 min) respective/y. Mean follow-up was 19.6 months (13-24 mo), all patients had good outcome, without obstruction in the MA G-3 study and regression of the hydronephrosis...